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關(guān)于支原體檢查,歐洲藥典說了些什么?

更新時間:2020-11-26  |  點(diǎn)擊率:1374

歐洲藥典近二十年來,已先后出了好幾版,在2007年版即提到支原體的NAT法(即核酸擴(kuò)增技術(shù),如PCR,熒光定量PCR等)可替代藥典傳統(tǒng)方法。

 

歐洲藥典強(qiáng)調(diào)了對核酸檢測方法的驗(yàn)證,包括檢測限、特異性和耐用性(robustness)。

在檢測限方面,歐洲藥典指出,核酸擴(kuò)增法如替代藥典規(guī)定的培養(yǎng)法,其檢測限需達(dá)到10CFU/ml,如替代指示細(xì)胞培養(yǎng)法(即DNA染色法),檢測限需達(dá)到100CFU/ml。也可通過核酸拷貝數(shù)確定檢測限,但應(yīng)提前建立CFU與核酸拷貝數(shù)之間的換算關(guān)系。

在特異性方面,歐洲藥典規(guī)定了NAT法應(yīng)能檢測污染細(xì)胞的常見的9種支原體,包括:

萊氏無膽甾原體(A. laidlawii

發(fā)酵支原體(M.fermentans

豬鼻支原體(M. hyorhinis

口腔支原體(M. oral

精氨酸支原體(M. arginini

肺炎支原體(M. pneumonia

雞毒支原體(M. gallisepticum

滑液支原體(M. synoviae

螺原體(Spiroplasma citri

并且,NAT法應(yīng)檢查與細(xì)菌、哺乳動物DNA是否有交叉反應(yīng)。

在耐用性方面,歐洲藥典強(qiáng)調(diào)檢測結(jié)果的穩(wěn)定性,不受微小波動的影響,因此一般需經(jīng)多輪測試。每次測試也需要做復(fù)孔。

那么,進(jìn)行方法驗(yàn)證還需要什么呢?標(biāo)準(zhǔn)品?對了。標(biāo)準(zhǔn)品好比一把尺子,能確定你所用的支原體PCRqPCR檢測試劑盒到底是否符合要求。當(dāng)然,標(biāo)準(zhǔn)品自身也需要標(biāo)定,這個也是可以檢測的。德國MB公司即提供有標(biāo)定過的10CFU/管和100CFU/管的支原體菌株,其中10CFUTM支原體靈敏度套裝囊括了以上提到的9種常見支原體,而且這些支原體都是凍干粉型滅活的,不會給實(shí)驗(yàn)室?guī)碇гw污染,這一點(diǎn)也令人很放心。

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